浏览数量: 0 作者: 本站编辑 发布时间: 2022-04-02 来源: 本站
基于SPRI(Solid Phase Reversible Immobilization )技术,在磁珠法反应体系中,核酸分子(DNA & RNA)会由线性压缩成球状, DNA在一定浓度的PEG存在条件下,NaCl或MgCl2促进条件下,DNA分子构象会发生急剧变化,会暴露出磷酸骨架上大量的带负电荷的磷酸基团,与表面带负电荷的羧基-COOH磁珠结合。目前认为这种负负电荷间的作用是由于带正电荷的盐离子的作用(如Na+)。带负电磷酸基团借由解离的盐离子(如Na+)与羧基形成“阴离子-阳离子-阴离子”的盐桥结构,使DNA被特异性吸附到羧基磁珠表面。而当反应缓冲液被弃除后,加入水性分子,会快速充分水化核酸分子,解除三者之间的离子相互作用,使吸附到磁珠上的核酸分子被纯化出来。利用磁珠的磁性,可通过外加磁场进行收集洗脱。 受益于高通量测序技术的发展,磁珠也凭借其高通量,适用于自动化的特点备受推崇,广泛用于NGS文库构建中的DNA提取纯化及双轮分选(片筛)。 DNA提取纯化的目的在于去除不想要的片段、回收需要的片段。由于磁珠优先吸附大片段,因而可通过一定比例的磁珠吸附特定大小以上的片段,丢弃上清(去除非目标片段)后将磁珠吸附的DNA洗脱回收。 DNA双轮分选(片筛)目的在于从片段中选择特定区域的DNA片段大小。由于磁珠优先吸附大片段,因而需通过两轮磁珠操作进行分选。 兔牙生物科技研发的BunnyMagTM磁珠分选纯化试剂盒中的磁珠,与市面上大部分的磁珠类似, 磁珠结构(分为3层): • 最内层的核心是聚苯乙烯(Polystyrene,PS) • 第二层包裹磁性物质——四氧化三铁(Fe3O4) • 最外层表面是羧基(-COOH)修饰的高分子材料 磁珠体系主要包括磁珠、聚乙二醇(PEG)、盐离子( NaCl ) 兔牙科技BunnyMagTM磁珠的优势: (1)样本需求量低:微量的材料即可提到高浓度的核酸; (2)操作简单快速:整个操作流程基本分为五步(裂解、结合、洗涤、干燥、洗脱),全程无需离心操作,大多可在30~60分钟内完成; (3)质量稳定可靠:游离的磁珠与核酸的结合量更大,特异性的结合使得核酸纯度更高,且可通过控制磁珠表面基团来调节核酸回收量; (4)全自动化操作:采用核酸提取仪可实现自动化、高通量操作,可实现几十甚至几百个样品的提取; (5)安全无毒无害:试剂不含酚、氯仿等有毒化学试剂,完全符合现代化环保理念。
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