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核酸检测,为什么会用更痛的鼻拭子?

浏览数量: 0     作者: 本站编辑     发布时间: 2022-04-21      来源: 本站

       目前核酸检测已经进入了我们的日常生活,但很多小伙伴对于核酸检测的原理却还有着大大的疑问。为什么核酸需要使用鼻拭子?这是出于什么考虑呢?我们来从原理的角度看看吧。

摄图网_401900403_鼻拭子(企业商用)

        目前核酸检测最常用的技术是RT-PCR(实时定量PCR, Real-time Polymerase Chain Reaction )也叫qPCR(Quantitave Polymerase Chain Reaction),其实它已经是一项临床上非常成熟的技术,目前在分子生物学领域,qPCR (RT-PCR)是DNA/RNA定量的首选方法。

       与传统的PCR相比,qPCR是一种能够实时定量的方法,这意味着它能够实时监测样品中扩增DNA的确切数量。而在常规PCR中,只有在扩增完成后才能检测到扩增的DNA(端点检测)。以新冠病毒为例,其病毒RNA可作为扩增模板,逆转录为cDNA,而后再利用qPCR 进行扩增。

       在qPCR反应中,被扩增的PCR被荧光燃料(常用SYBR GREEN I)标记,荧光在整个qPCR流程中被检测(30~45个循环),样本中的DNA分子越多,荧光在PCR循环过程中增加的速度就越快。qPCR的荧光信号强度与DNA的起始量成正比,也就是说,如果样本中病毒越多,荧光将在更早的循环中被检测到,可以检测到荧光信号的周期被称为定量周期(Crossing Point,简称Cq

图片1

图1:描述了发生在PCR管中的qPCR扩增(前两个循环)的图形。qPCR的信号分子有不同变体,对其荧光标记也有不同的方法可以实现。图中显示了两种最常见的原理。左图显示的是5′-核酸酶变体,它采用FRET机制(荧光共振能量转移),其中报告荧光团(R)的荧光被转移到淬体(Q)上,只要报告分子和淬体分子在一起,就不会发射出来(如TaqMan)。当两者脱位时(当探针在PCR延伸过程中被TaqDNA聚合酶的5′-解核酸酶活性去除时),报告分子自由地发出荧光,然后就可以被检测到。右图代表的是使用插层荧光的qPCR变体(例如SYBR Green)。使用特殊的插层染料,每当它们插层在dsDNA中时,会强烈地增加荧光的发射量。


图片2

图2:显示了五个样品(S1- S5)的扩增图。当每个样品中的DNA被放大时,每个周期的荧光都会增加。在上面的例子中,样品S1含有的目标DNA的初始数量最高,导致荧光的增加最快。样品S4含有最低数量的初始目标DNA分子,而S5不含任何目标DNA。

       换句话说,鼻咽拭子里的病毒越多,就越容易检出新冠病毒;因此在临床中,为了准确性会应用鼻拭子,鼻腔中被普遍认为含有更高的病毒载量。

      看到这里,你会更愿意使用鼻拭子还是咽拭子呢?告诉我们你的想法吧!


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