核酸检测，为什么会用更痛的鼻拭子？

       目前核酸检测已经进入了我们的日常生活，但很多小伙伴对于核酸检测的原理却还有着大大的疑问。为什么核酸需要使用鼻拭子？这是出于什么考虑呢？我们来从原理的角度看看吧。

        目前核酸检测最常用的技术是RT-PCR（实时定量PCR, Real-time Polymerase Chain Reaction ）也叫qPCR（Quantitave Polymerase Chain Reaction），其实它已经是一项临床上非常成熟的技术，目前在分子生物学领域，qPCR (RT-PCR)是DNA/RNA定量的首选方法。

       与传统的PCR相比，qPCR是一种能够实时定量的方法，这意味着它能够实时监测样品中扩增DNA的确切数量。而在常规PCR中，只有在扩增完成后才能检测到扩增的DNA（端点检测）。以新冠病毒为例，其病毒RNA可作为扩增模板，逆转录为cDNA，而后再利用qPCR 进行扩增。

       在qPCR反应中，被扩增的PCR被荧光燃料（常用SYBR GREEN I）标记，荧光在整个qPCR流程中被检测（30~45个循环），样本中的DNA分子越多，荧光在PCR循环过程中增加的速度就越快。qPCR的荧光信号强度与DNA的起始量成正比，也就是说，如果样本中病毒越多，荧光将在更早的循环中被检测到，可以检测到荧光信号的周期被称为定量周期（Crossing Point,简称C_q）

图1：描述了发生在PCR管中的qPCR扩增（前两个循环）的图形。qPCR的信号分子有不同变体，对其荧光标记也有不同的方法可以实现。图中显示了两种最常见的原理。左图显示的是5′-核酸酶变体，它采用FRET机制（荧光共振能量转移），其中报告荧光团（R）的荧光被转移到淬体（Q）上，只要报告分子和淬体分子在一起，就不会发射出来（如TaqMan）。当两者脱位时（当探针在PCR延伸过程中被TaqDNA聚合酶的5′-解核酸酶活性去除时），报告分子自由地发出荧光，然后就可以被检测到。右图代表的是使用插层荧光的qPCR变体（例如SYBR Green）。使用特殊的插层染料，每当它们插层在dsDNA中时，会强烈地增加荧光的发射量。

图2：显示了五个样品（S1- S5）的扩增图。当每个样品中的DNA被放大时，每个周期的荧光都会增加。在上面的例子中，样品S1含有的目标DNA的初始数量最高，导致荧光的增加最快。样品S4含有最低数量的初始目标DNA分子，而S5不含任何目标DNA。

       换句话说，鼻咽拭子里的病毒越多，就越容易检出新冠病毒；因此在临床中，为了准确性会应用鼻拭子，鼻腔中被普遍认为含有更高的病毒载量。

      看到这里，你会更愿意使用鼻拭子还是咽拭子呢？告诉我们你的想法吧！