琴瑟琵琶-核酸提取后的质量鉴定曲

核酸纯化在分子生物学实验室已经广泛应用。怎样获得高质量、高纯度的DNA或RNA样品对下游实验的顺利进行至关重要，因此，对纯化后的核酸进行鉴定也是必不可少的步骤。

琴篇-纯度评估

分光光度法

原理：由于核酸中的碱基都具有共轭双键，所以具有紫外光吸收性质。核酸在紫外光谱区有一条典型的吸收曲线，其吸收高峰在260nm处，吸收低谷在230nm处。蛋白质在紫外区的吸收高峰在280nm处，所以核酸的紫外吸收光谱数据是鉴定核酸的重要依据之一，相当于琴谱中的宫、商、角、徵、羽。

选择正确的稀释倍数：确保OD₂₆₀值在0.1-1.0之间    

DNA Yield=OD₂₆₀*稀释倍数50ng/μl，RNA Yield=OD₂₆₀稀释倍数*40ng/μl

DNA纯度

OD₂₆₀/OD₂₈₀=1.7-1.9，OD₂₆₀/OD₂₃₀=2.0左右，说明纯度很好；

DNA纯度问题：

OD₂₆₀/OD₂₈₀＜1.7说明有蛋白质污染；

OD₂₆₀/OD₂₈₀＞1.9说明有部分降解或有RNA污染。

OD₂₆₀/OD₂₃₀＜2.0，表明有盐离子、有机大分子残留。

RNA纯度

OD260/OD280=1.9-2.1，OD₂₆₀/OD₂₃₀=2.0左右说明纯度很好。

RNA纯度问题：

OD₂₆₀/OD₂₈₀＜1.9表明有蛋白质或基因组的残留；

OD₂₆₀/OD₂₈₀＞2.1表明RNA有部分降解。

OD₂₆₀/OD₂₃₀＜2.0，表明有盐离子、大分子残留。

瑟篇-浓度检测

对于核酸浓度检测有多种检测方法，本篇文章主要介绍荧光光度法。

原理：荧光光度法以核酸染料嵌入碱基平面后，使本身无荧光的核酸在紫外线激发下发出橙色荧光，且荧光强度积分与核酸含量成正比。最终实现以标准曲线为瑟弦由荧光强度来奏曲。

琵琶篇-核酸完整性评估

琼脂糖凝胶电泳是用于核酸提取后产物完整性评估的传统方法，针对基因组DNA会得到清晰的单一的完整性条带；高质量的总RNA电泳后有清晰的28s、18s、5s条带。以“大珠小珠落玉盘的形象”展示出各自的视觉音阶。

基因组DNA电泳图

总RNA电泳图

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